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细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
1、细胞培养是在实验室中通过人工方法培育和繁殖细胞的过程，细胞培养的一般步骤包括：细胞株选择和准备、培养基配制和消毒、细胞接种、培养条件控制、细胞培养和维护、细胞检测和鉴定。
2、一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。
3、细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
4、原代培养 （一）过程 原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。原代培养的方法很多，基本和最常用的是组织块培养法和分离细胞法。
5、预热完全培养基（贴壁和半贴壁细胞还需要预热胰酶和PBS）。 细胞收集。（1）悬浮细胞直接收集培养容器中的所有细胞悬液至离心管中。
6、注意事项：考核无菌操作过程，以及最后细胞是否污染。加入pbs或胰酶需冲到皿壁上，避免直接冲到细胞。考核吹打过程。力道要轻柔，减少机械损伤。吹打过程中不能全部打出，枪不按到底，防止产生气泡。
细胞培养过程中污染是如何发生的?要怎么有效避免培养箱污染呢?
1、防止细胞培养出现污染的方法如下：从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
2、准备工作：准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
3、实验人员的操作 细胞培养体系 细胞培养环境 细胞来源也会有所影响 为了减少污染对细胞培养的影响，必须建立细胞冻存库。
4、添加抗生素 各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好。
5、彻底清洁培养间，显微镜室。然后，紫外灯多照射一端时间消毒空气。彻底清洁培养箱：（1）每个隔板仔细清洗，火烤。（2）培养箱大换水，换成新鲜干净的蒸馏水。（3）培养箱内壁用酒精棉球或者稀过氧乙酸认真擦洗。
细胞培养常用器材有哪些?
1、细胞培养中需用多种金属器材，用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等，常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。
2、重要的实验仪器蒸馏器、储品柜、超净工作台、水浴锅、三氧消毒杀菌机。细胞培养的无菌操作需要在无菌台上操作。
3、细胞培养板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需要选择）。
4、用到的器材：就是CO2培养箱，超净工作台，离心机，培养皿（或培养瓶），移液枪，操作中主要注意无菌操作。还有胰酶消化时间，离心转速 等。
5、一般微生物实验室常用仪器有：恒温培养箱、霉菌培养箱、生化培养箱、超净工作台、高压灭菌器、烘箱等。分子生物学以及细胞生物学实验室常用仪器有：二氧化碳培养箱、生物安全柜、低温保存箱、烘箱、高压灭菌器等。
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